Módszerek laboratóriumi diagnosztika
Immunológiai módszerek fontos diagnosztikai és prognosztikai sok reumás megbetegedések.
Tanulmány nemspecifikus immunitás tartalmazza a vizsgáló a leukociták és monociták a vérszérumban, komplement komponensek, becslést a mobilitás, fagocita és mikrobicid aktivitását mononukleáris fagocita, gyulladáskeltő citokinek (IL-ip, IL-6, TNF-alfa, és mások.).
A leggyakrabban használt:
♦ reakciót leukocita migráció gátlást (RTML) jelenlétében antigének és mitogének: RTML fitohemagglutininnel (PHA), konkanavalin A (Con A), allergének hemolitikus Streptococcus, Staphylococcus. A reakciót alapul tulajdonát limfocita érzékenyítés specifikus antigéneket képez stabilizáló limfokinek, gátlására leukociták; nagyobb funkcionális aktivitást a limfociták, a kisebb számok RTML;
♦ limfocita blaszt transzformációs reakció (BTR), amelyet értékeltünk a funkcionális aktivitását a T-limfociták. Mitogénekkel (PHA), Con A, és antilimfotikus szérum és mtsai. Limfocita transzformáció történik limfoblasztok (a nagyobb blaszt sejtek képződik, annál nagyobb a aktivitását a T-limfociták).
Szubpopulációk T-limfociták határoztuk monoklonális antitestekkel.
Ahhoz, hogy értékelje a funkcionális állapotát humorális immunitás alkalmazásával kvantitatív meghatározására immunglobulinok a vérplazmában. Immunglobulin (lg) - olyan fehérjék rendelkező antitest funkciója és felosztva öt fő osztálya van: IgG, IgA, IgM, IgD, IgE.
IgG szérumban jelen lévő legnagyobb koncentrációban (6,39-13,49 g / l), ez 80% -át az antitest-aktivitás. Különböztesse 4 alosztály IgG: IgG2 (60-70%), IgG2 (20-30%), IgG3 (5-8%) és lgG4 (1-3%).
IgA a fő szekréciós immunglobulin található nyál, könnyek, a hörgő és bélnedvekig és az anyatej. A titkok IgA dimer formában tartalmazó J-lánc, egy másik peptid, az úgynevezett szekréciós komponens. A IgA koncentrációja a szabvány 0,7-3,12 g / l.
IgM tartalmaz 5 monomer alegységeket kapcsolódó diszulfid hidak és J-lánc, amely egy pentamer. szérum IgM koncentrációja általában összege 0,86-3,52 g / l.
Az IgD nyomokban a szérumban, de egy alapvető típusú immunglobulin jelen a membránon a B-limfociták. IgE fontos szerepet játszik a reakciók azonnali túlérzékenységi reakciók.
Ahhoz, hogy meghatározzuk a koncentráció a fő osztálya immunglobulinok (IgG, IgM, IgA) módszerével radiális immundiffúziós vagy nefelometriás technikával, IgE - rendkívül érzékeny radioimmunoassay vagy enzim-immunoassay technikákkal.
Koncentrációjának meghatározása az immunglobulinok kerülnek felhasználásra, a diagnózis a primer vagy a szekunder immunhiányos (ezekben az esetekben, a csökkenés a koncentráció a fő osztálya immunglobulinok), és a monoklonális immunoglobulinopaty (kombinálva immunelektroforézis szérum és vizelet).
A leggyakoribb formája a immunhiányos IgA-immunodefi-op, a fejlesztés, amely néha megfigyelhető reumatikus betegségek, és is történhet a háttérben bizonyos gyógyszerek (D-penicillamin, szulfaszalazin, kaptopril és mások.). Növekvő koncentrációjú IgA gyakran megfigyelhető szeronegatív csigolya, vérzéses vasculitis, Sjögren-szindróma, a psoriasisos arthropathia.
Gyakran a gyulladásos reumás megbetegedések figyelhető fejlődésének poliklonális Hyper.
Rheumatoid faktor (RF) autoantitestek Fc-fragmens IgG, bár adott esetben társított IgM és IgA.
Talán blokkoló reumatoid faktor autológ IgG, amely növekedéséhez vezet százalékos rejtett, Magyarország komplexbe (elhúzódó időtartama rheumatoid arthritis vistseritami).
Magyarország azonosítani az osztály M alkalmazni:
♦ latex agglutináció inert reakció-vei bevont latexrészecskék humán Ig. A legmagasabb szérum hígítás adja, agglutinációs titerrel tekinteni reakciót. A titer 1:20 vagy magasabb pozitívnak tekinthetők;
♦ válasz Vaaler Rosa birka vörösvérsejtek bevonva nyúl anti-birka vörös vérsejtek.
A legmagasabb szérum hígítás adja agglutinációs diagnosztikai szempontból fontos, ha nem kevesebb, mint 1:32.
Lupus (LE) sejtek képződésére. A jelenléte LE-sejtek jelenléte miatt a szérumban az IgG osztályú antitestek DNS-hiszton komplex, amelyek reagálnak a sejtmagokat, melyek különféle sejtekből eredményeként megsemmisítése ezeket a sejteket. LE-sejtek találhatók 60-70% SLE betegek. Ezek érett neutrofil fagocitáiják nukleáris anyag az elpusztult sejteket. A citoplazmában a neutrofilek talált nagy, homogén befogadás (hematoxilin részecskéken).
Azokban az esetekben, hiányos fagocitózis neutrofilek által felhalmozott körül a borjú hematoxilin-alakú foglalat (rozetta képződését jelenség). Eredmény kimutatják legalább LE-5 sejteket 1000 fehérvérsejtek tekinthetők pozitív. Az egység mennyisége LE-sejtek találhatók 10% az RA-betegek, krónikus aktív májgyulladás, a gyógyszer allergia, periarteritis nodosa, szisztemikus szkleroderma, dermatomiozitisz, kevert kötőszöveti betegség.
Az antinukleáris antitestek (AHA) leggyakrabban meghatározott reumatikus betegségek és fordulnak elő több mint 90% -ánál SZST. Ezek egy család autoantitestek kölcsönhatásban ribonukleinsavak és fehérje, nucleus, citoplazmatikus antigének. AHA által meghatározott közvetett immuno kettős immun és kontrelektroforeza, ELISA és immun.
Amikor indirekt immunfluoreszcens módszerrel a gyakorlatban, hat fajta színező vagy lumineszcens, magok, amelyek fontosak a diagnózis szisztémás betegségek, a kötőszövet:
♦ homogén festés miatt az antitestek jelenlétét a kettős szálú DNS-t és a hisztonok, a legtöbb jellemző SLE és a lupus adagolási;
♦ perifériás által okozott elszíneződés elleni cirkuláló antitesteket az magmembránok (kifejezetten SLE);
♦ Szemcsés festést fordul elő leggyakrabban, jelezve a jelenlétét a különböző AHA, így a legalacsonyabb specificitást (megjegyezte SLE, RA zsigeri megnyilvánulásai, kevert kötőszöveti betegség);
♦ nukleoláris (nukleoláris) lumineszcencia miatt az antitest komponensekhez nucleolus előfordul SSc, Sjögren-féle betegség; alkalmanként ANF találhatók endokrin betegségek (poliendokrinopatiya, cukorbetegség I típusú, pajzsmirigygyulladás, hyperthyreosis), bőrbetegségek (psoriasis, pemphigus), valamint a háttérben a terhesség transzplantáció után a szervek és szövetek (fejlesztési reakció „graft-versus-host”), y hemodializált betegeknek;
♦ centromeron lumineszcencia figyelhető meg a megjelenése antitestek centromert kromoszómák (jellemző krónikusság MIC);
♦ citoplazmatikus fény jelzi a elleni antitestek jelenlétét tRNS-szintetáz, különösen Jo-1 (gyakori a bőrgyógyászati és polymyositis).
Módszerek a radioaktív és immun kötő, radiális immundiffúziós, immunprecipitáció kiderült AHA specifikus nukleáris antigének.
Antitestek a dezoxiribonukleinsav (DNS). Antitestek a natív (kettős szálú) DNS, különösen azok, amelyek radioimmunassayval tesztek (Pharr módszer), viszonylag specifikus az SLE-ben. Azok meghatározása elengedhetetlen a értékelése a betegség aktivitásáról, előre a fejlődés a fellángolások és a terápia hatékonyságát. Antitestek a denaturált (egy-) DNS-kevésbé specifikus legyen SLE és gyakran detektáltunk más reumás megbetegedések.
Antitestek hisztonokon. A hisztonok - egy mag összetevőt tartalmaznak, amely három alegységből áll: két dimerek H2A-H2B, hogy kétoldalt a NS-H4 tetramer és kapcsolódó harmadik alegység, amely két fordulattal a DNS-molekula.
Antitestek a hisztonok H2A-H2B megtalálhatók majdnem minden betegnél a kábítószer lupus szindróma (indukált novokainamidom), kapó betegeknél prokainamid, de nincs tünetei lupus, valamint a 20% -a az SLE betegek.
Antitestek ribonukleoprotein (RNP). Antitestek egy ribonukleoprotein amely egy anti-Sm, anti-snRNP (U1RNP), anti-Ro / SS-A, anti-La / SS-B, talált SLE összesen több, mint az antitestek, hogy kettős szálú DNS-t. a vér koncentrációja ezen antitestek rendkívül magas. Talált kevert kötőszöveti betegség, legalábbis - a SLE, ki vezet a klinikai megnyilvánulása bőrelváltozások, szubakut SSD és más autoimmun reumás betegségek.
Az antitestek Sm (Smith) -antigenu. Antitestek a Sm-antigén található csak SLE. Immunfluoreszcenciával módszerrel azonosítjuk az esetek 30% és 20% - módszer szerint a hemagglutinációs. Antitestek a Sm-antigén nem detektáltunk más reumás megbetegedések, így azok tekinthetők markerei SLE antitestek és felderítése az egyik diagnosztikai kritériumait a betegség. Jelenlétében a Sm-antitestek figyelhető egy rosszindulatú betegség, a központi idegrendszer, a lupus pszichózis és relatív megőrzését a veseműködés. Azonban, a antitestek szintje a Sm-antigén nem korrelált a aktivitással és klinikai altípusú SLE.
Az anti-Ro (Robert) / SS-A ellen irányulnak a nukleáris ribonukleoprotein, amely összefüggésbe hozható a Yl-Y5 citoplazmatikus RNS, az RNS-polimeráz III. Attól függően, hogy az érzékenység az alkalmazott módszerek tanulmányozása antitest Ro / SS-A megtalálható 60-78% -ánál a Sjögren-szindróma, a 96% -ánál a Sjögren-féle betegség, és 35-57% -a az SLE betegek.
A SLE ellenanyag-termelés társított adatokat a konkrét laboratóriumi és klinikai megnyilvánulásai rendellenességek: fényérzékenység, Sjogren-szindróma, tüdőkárosodás, lymphopenia és thrombocytopenia hiperprodukciójá RF. A koncentráció növelése a antitestek Ro / SS-A kombinációban hiper-IgM-Magyarországon gyakran megfigyelhető ANF-negatív betegségek altípus (2-5% SLE) - az úgynevezett szubakut kután lupus.
Az LA elleni antitestek (Lane) / SS-B ellen irányul kapcsolatos protein transzkriptumai RNS polimeráz III. Az LA elleni antitestek / SS-B a legtöbb esetben fordul elő együtt antitestekkel Ro / SS-A, míg az utóbbi akkor fordulhat elő, elszigetelten. Az LA elleni antitestek / SS-B találhatók a betegség és a Sjögren-szindróma, kombinált RA és SLE (de nem szisztémás scleroderma), és primer biliaris cirrhosis. Az SLE antitestek SS-B / La-antigén nagyobb valószínűséggel fordul elő a betegség korai, amely fejleszti az időskori, és összefügg az alacsonyabb előfordulását nephritis fejlődés.
Scl-70 antitestek általában kimutatható diffúz formája szisztémás szklerózis. Ebben a betegségben jelenlétében Scl-70 antitestek kombinációban gének szállítására HLA-DR3 / DRw52 17-szeres kialakulásának fokozott kockázatát tüdőfibrózis. Kimutatása Scl-70 antitestek betegeknél izolált Raynaud-jelenség jelzi a magas kialakulásának valószínűségét szisztémás scleroderma.
Antitsentromernye antitestek (ASA) talált 20% -ánál a szisztémás sclerosis (legtöbbjük bizonyíték van CREST-szindróma), legalább - a primer biliaris cirrhosis (fele ezek a betegek, vannak jelei a scleroderma), és nagyon ritkán - a krónikus aktív hepatitis, és az elsődleges pulmonáris hipertenzió. Elleni antitestek centromer tekinthető kedvezőtlen prognosztikus indikátora a szisztémás sclerosis kifejlődésében betegeknél Raynaud szindróma.
Ellenanyagok aminoatsilsintetaze tRNS (antisintetaznye antitestek) detektáljuk jelenlétében betegek polymyositis intersticiális tüdőbetegség. Általában szintetáz antitesteket 40% -ánál a polymyositis, 54% betegek idiopátiás dermatomyositis a formák esetében ezek a betegségek, és csak 6% -ánál polymyositis, amely az egyik megnyilvánulása DBST egyéb; a tumor myositis, ezeket az antitesteket nem voltak kimutathatók. Termékek antisintetaznyh antitestek kifejlődésével társul az úgynevezett „antisintetaznogo szindróma.”
Antifilaggrinovye antitestek (aPL) egy család, amely magában foglalja a antikeratinovye antitest antiperinuklearny faktor antitestek Sa-antigén és antitestek közelmúltban leírt ciklikus citrullin-tartalmú peptid. A modern koncepciók, a fő antigén determináns ezen antitestek által felismert van citruiiinezett peptideket, amelyek, különösen, jelen az ízületi hártyát a rheumatoid arthritis (RA). AFA nagyon specifikus RA. A legszélesebb körben alkalmazott az AFA a diagnózis korai RA. Számos tanulmány kimutatta, egy agresszívebb során RA az ezen antitestek jelenléte a betegekben.
Antitestek a foszfolipidek (APL) - heterogén csoportját autoantitestek, amelyek reagálnak a negatív töltésű (foszfatidilszerin, foszfatidil-inozit, kardiolipin) és semleges (foszfatidil, foszfatidil-kolin) foszfolipidek. Ezek közé tartozik a lupus antikoaguláns, kardiolipin antitestek és tényezők, amelyek meghatározzák a fejlesztés a téves pozitív Wasserman.
Lupus antikoaguláns (LA) - immunglobulinok osztályhoz, IgG és / vagy IgM, in vitro gátolják egy vagy több fosfolipidzavisimyh véralvadási reakciókat, BA kezeljük reprezentatív családként antitestek foszfolipidek, ezek szintézisét társított fejlesztése artériás vagy vénás trombózis.
Anticardiolipin antitestek (ACL). Annak megállapításához, a CLA használt immunoassay módszerrel. CLA termékek (különösen, ha magas titerű IgG ACL), valamint a kialakulását BA, együtt jár a fejlődését antifoszfolipid szindróma.
Téves pozitív Wassermann reakció gyors szerológiai diagnózisának a szifilisz alapuló módszerrel standard szuszpenziót flokkulációs foszfolipid (kardiolipin) a beteg szérumában, amely anti-treponemális antitest (reagin). Pontosabb diagnózis szifilisz immunfluoreszcenciával eljárás treponemális antigént.
A betegek 15-20% -a az SLE észlel álpozitív Wassermann reakció, és 30% az egészséges egyének hamis pozitív Wassermann vegyületeket a következő fejlődő SLE. Nagyon gyakran álpozitív Wassermann betegeknél kimutatott antifoszfolipid szindróma.
Antineutrophil tsitoplazmatineskie antitestek (ANCA). ANCA egy család elleni autoantitestek specifikus antigének a citoplazmában a neutrofilek. Kétféle az ANCA, hogy határozza meg indirekt immunfluoreszcenciás módszerrel rögzített neutrofilek abszolút alkohollal donorok. Antitestek okoz diffúz proteináz III (klasszikus) és citoplazmatikus izzás jelöljük k-ANCA vagy p-ANCA. Elleni antitestek mieloperoxidáz, elasztáz és laktoferrin jellemzi perinukleáris emissziós típusú, és kijelölt perinukleáris vagy p-ANCA. ANCA gyakran kimutatható szisztémás vasculitis.
Streptococcus-fertőzés-Streptococcus növekedést okoz az antitest-titer. Meghatározása anti-Streptococcus antitesteket diagnosztikai célból alkalmazzuk az akut reumás láz (akut reumás láz) és az akut glomerulonephritis.
A legtöbb széles körben antitestek meghatározására streptolysin O (ASL-O), sztreptokináz (ACK) és streptodezoksiribonukleaze (anti-DNáz B). A növekedés a titerek SLA-O található több, mint 2/3 a betegek akut reumás láz, és csak a fele a betegek akut glomerulonephritis. Maximális titereket anti-Streptococcus azonosított antitestek fejlődése során arthritis és fejlesztése során carditis és chorea titereket ezen antitestek jelentősen csökkennek, ami csökkenti a diagnosztikai értékét ezt a tesztet.
Fontos a diagnózis reakciót ellenanyagok kimutatására egy fertőzés után: Wassermann reakció, komplement fixációs reakció tuberkulózis, pseudotuberculosis, Yersinia, Shigellosis és egyéb antigének, HBs-antigének, gonococcus (Bordet-Gengou reakció) és brucellózis (reakció Wright-Heddlsona) antigének titer anti-Chlamydia ellenanyagok.
Krioglobulinok - egy csoport szérum fehérjék abnormális képes reverzibilis kicsapással vagy gél-képzéssel alacsony hőmérsékleten. Krioglobulinok lehet kimutatni különböző betegségek a belső szervek, beleértve a gyakran a szisztémás reumás megbetegedések.
Attól függően, hogy a készítmény krioglobulinok van osztva három fő típusa. I. típusú áll, egy monoklonális immunglobulinok IgA vagy IgM, legalábbis - monoklonális könnyű láncok (Bence Jones fehérje). II típusú (megfigyelt úgynevezett vegyes krioglobulinémia) tagjai monoklonális immunglobulin (rendszerint IgM, ritkán - IgA vagy IgG), antiglobulin elleni hatással poliklonális IgG-vel. III típusú (megfigyelt úgynevezett vegyes krioglobulinémia) áll egy vagy több osztályba tartozó poliklonális immunglobulinok. A leggyakoribb formája a krioglobulinémia reumás betegségekben ő a III típusú található SLE, RA, szisztémás szklerózis, Sjogren-féle szindróma.
A keringő immunkomplexek (CIC). Növekvő koncentrációjú tükrözi CEC gyulladásos és immunológiai aktivitását patológiás folyamat SLE, RA, szeronegatív csigolya.